Дом » Биологические науки » Почему в агарозный гель добавляют бромид этидия?

Почему в агарозный гель добавляют бромид этидия?

451
Последнее обновление: 2021-09-20 13:16:25


Ответить:
Бромид этидия ( EtBr ) иногда добавляют в рабочий буфер во время разделения фрагментов ДНК с помощью электрофорез в агарозном геле . Он используется, потому что при связывании молекулы с ДНК и освещении источником ультрафиолетового света можно визуализировать рисунок полос ДНК. Почему здесь важно добавлять флуоресцентные красители в агарозный гель? Исследовательские лаборатории обычно используют флуоресцентные окраски ДНК , потому что они чрезвычайно чувствительны, что делает легко обнаружить небольшие количества ДНК. Однако для визуализации фрагментов ДНК необходимо использовать источник ультрафиолетового (УФ) света. А как приготовить агарозный гель с бромистым этидием? Метод I. Включение бромида этидия в гель и буфер Растворите агарозу в буфере в соответствии со стандартным протоколом приготовления агарозного геля. Дайте гелю остыть до 60-70 ° C. Добавьте EtBr до 0,5 Конечная концентрация мкг / мл. (Базовый раствор обычно составляет 10 мг / мл, и требуется 5 мкл исходного раствора на 100 мл геля). Залейте гель и дайте ему застыть как обычно. Просто так, сколько бромид этидия добавляют в агарозный гель? (Необязательно) Добавьте бромид этидия ( EtBr ) до конечной концентрации примерно 0,2-0,5 мкг / мл (обычно примерно 2-3 мкл исходного лабораторного раствора на 100 мл геля ). EtBr связывается с ДНК и позволяет визуализировать ДНК в ультрафиолетовом (УФ) свете. Почему глицерин используется в гель-электрофорезе? Глицерин (5-10%) увеличивает плотность образца, так что образец будет располагаться на дне лунки для образца геля . . Глицерин также используется для отливки градиентных гелей и в качестве стабилизатора белка и компонента буфера для хранения.

up